流式圈門看似只是把散點圖上的細胞群圈出來,但真正決定結果能不能用的,是對照設置、碎片排除、單細胞篩選、活細胞篩選和目標亞群分群有沒有按順序完成。
簡單來說,FSC 主要反映細胞大小,SSC 主要反映細胞內部復雜度。先在 FSC/SSC 圖上找到主細胞群,再一步步排除碎片、粘連體和死細胞,最后用 CD3、CD19 等特異標記讀出 T 細胞、B 細胞比例。
只有把陰性邊界、熒光補償、非特異信號和異常事件都排干凈,最后得到的亞群比例才真正有解釋價值。
圈門不是「憑感覺畫得像」,而是每一步都在上一步合格細胞里繼續篩選。順序對了,數據才穩,復測才不容易飄。
編輯:冷漠小 z
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